腫瘤細胞在代謝上表現出較強的糖酵解活性,丙酮酸激酶是糖酵解過程中的重要代謝酶之一,研究表明,丙酮酸激酶同工酶2(PKM2)的高表達與黑素瘤患者的預後負相關。重樓是中醫治療腫瘤的常用藥物之一,其有效成分重樓皂苷Ⅰ對多種細胞增殖具有抑製作用,但對黑素瘤細胞作用如何目前尚不清楚。
腫瘤細胞在代謝上表現出較強的糖酵解活性,丙酮酸激酶是糖酵解過程中的重要代謝酶之一,研究表明,丙酮酸激酶同工酶2(PKM2)的高表達與黑素瘤患者的預後負相關。重樓是中醫治療腫瘤的常用藥物之一,其有效成分重樓皂苷Ⅰ對多種細胞增殖具有抑製作用,但對黑素瘤細胞作用如何目前尚不清楚。龍劍文等觀察了重樓皂苷Ⅰ對黑素瘤A375細胞增殖和凋亡的影響,以及對Bcl-2、Bcl-2相關X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase-3)、細胞周期蛋白D1(cyclin D1)、PKM2蛋白表達的影響。
采用CCK8法測定0(對照組)、1.5、3.0、6.0 mg/L重樓皂苷Ⅰ對正常人黑素細胞和A375細胞增殖的影響;Hoechst33258熒光染色法觀察細胞凋亡形態;流式細胞儀檢測A375細胞周期變化及細胞凋亡水平;熒光染料(DCFH-DA)測定A375細胞內活性氧的變化;羅丹明123染色測定線粒體膜電位變化;利用分光光度法檢測重樓皂苷Ⅰ處理後A375細胞內ATP和上清液中乳酸、葡萄糖含量;Western印跡法檢測A375細胞內Bcl-2、Bcl-2相關X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3、細胞周期蛋白D1、丙酮酸激酶同工酶2(PKM2)表達。在工作濃度內重樓皂苷Ⅰ對正常人黑素細胞增殖無明顯影響,但能明顯抑製 A375 細胞的增殖(P < 0.01);熒光顯微鏡下發現,重樓皂苷Ⅰ處理後 A375 細胞出現明顯的凋亡形態。0(對照組)、1.5、3.0、6.0 mg/L重樓皂苷Ⅰ分別處理A375細胞後,隨重樓皂苷Ⅰ濃度增加,細胞凋亡率(分別為4.25% ± 1.27%、10.03% ± 1.49%、36.62% ± 1.97%、44.11% ± 2.47%)逐漸升高(F = 665.7,P < 0.01),G0/G1期細胞比例(分別為54.13% ± 2.57%、67.35% ± 3.79%、74.39% ± 3.29%、82.29% ± 3.99%)亦漸增多(F = 71.81,P < 0.01);細胞內活性氧呈明顯上升趨勢,細胞線粒體膜電位呈明顯下降趨勢(P < 0.01);細胞內ATP含量下降(P < 0.01),培養液中乳酸含量下降,葡萄糖含量上升(P < 0.01);細胞Bax、cleaved-caspase-3蛋白表達增多,但Cyclin D1、Bcl⁃2和PKM2蛋白表達下降(P < 0.01)。
重樓皂苷Ⅰ可能通過激活細胞內活性氧的產生,引起線粒體膜電位下降,誘導A375細胞凋亡,並通過抑製PKM2、細胞周期蛋白D1表達,使細胞阻滯於G0/G1期。
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