眼科

抑製整合素連接激酶表達水平對視網膜母細胞瘤細胞增殖和凋亡的影響

作者:史源 整理 來源:醫學論壇網 日期:2012-10-18
導讀

         日前,武漢大學人民醫院眼科中心陳震、邢怡橋、徐衝共同發表文章,旨在探討抑製整合素連接激酶(ILK)基因表達水平對視網膜母細胞瘤細胞株HXO -Rb44增殖和凋亡的影響。研究表明,siRNA可抑製HXO-Rb44細胞中ILK mRNA和蛋白的表達水平,抑製HXO-Rb44細胞增殖,並誘導其凋亡。該文發表在《中華眼科雜誌》2012 年第48卷第2期上。

  日前,武漢大學人民醫院眼科中心陳震、邢怡橋、徐衝共同發表文章,旨在探討抑製整合素連接激酶(ILK)基因表達水平對視網膜母細胞瘤細胞株HXO -Rb44增殖和凋亡的影響。研究表明,siRNA可抑製HXO-Rb44細胞中ILK mRNA和蛋白的表達水平,抑製HXO-Rb44細胞增殖,並誘導其凋亡。該文發表在《中華眼科雜誌》2012 年第48卷第2期上。

  研究通過脂質體轉染法將ILK小幹擾RNA( siRNA)轉入HXO-Rb44細胞。實驗分為4組:ILK siRNA幹預組、陰性對照siRNA組、空脂質體組、空白對照組。RT-PCR法和免疫印跡法分別檢測轉染後48 h ILK mRNA和蛋白的表達水平;CCK-8法檢測轉染後48 h的細胞增殖抑製率;Annexin V/PI免疫熒光雙染色法和流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。各組資料總體比較采用單因素方差分析。

  結果顯示,采用脂質體轉染法化學合成的ILK siRNA可以成功轉染HXO-Rb44細胞。RT-PCR法檢測結果顯示,ILK siRNA幹預組(0.12 ±0.02) ILK mRNA表達水平明顯降低,與陰性對照siRNA組(0.45±0.05)、空脂質體組(0.42±0.04)和空白對照組(0.40±0.04)相比,差異有統計學意義(F=12.781,P=0.000)。免疫印跡法檢測結果顯示,與空白對照組(0.38±0.07)、空脂質體組(0.40±0.05)及陰性siRNA對照組(0.43±0.03)相比,ILK siRNA幹預組(0.10±0.03)的ILK蛋白表達水平明顯降低,差異有統計學意義(F=18.647,P=0.000)。與空白對照組(0%)、空脂質體組(1.8%)及陰性siRNA對照組(2.1%)比較,ILK siRNA幹預組(35.0%)的細胞增殖抑製率明顯增高(F =23.573,P=0.000)。Annexin V/PI免疫熒光雙染色法和流式細胞儀檢測結果顯示,ILK siRNA幹預組Annexin V陽性細胞明顯增多,陽性率為26.5%,高於陰性對照siRNA組(5.3%)、空脂質體組(5.0%)、空白對照組(4.6%) (F=65.217,P=0.000)。

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