日前,武漢大學人民醫院眼科中心陳震、邢怡橋、徐衝共同發表文章,旨在探討抑製整合素連接激酶(ILK)基因表達水平對視網膜母細胞瘤細胞株HXO -Rb44增殖和凋亡的影響。研究表明,siRNA可抑製HXO-Rb44細胞中ILK mRNA和蛋白的表達水平,抑製HXO-Rb44細胞增殖,並誘導其凋亡。該文發表在《中華眼科雜誌》2012 年第48卷第2期上。
日前,武漢大學人民醫院眼科中心陳震、邢怡橋、徐衝共同發表文章,旨在探討抑製整合素連接激酶(ILK)基因表達水平對視網膜母細胞瘤細胞株HXO -Rb44增殖和凋亡的影響。研究表明,siRNA可抑製HXO-Rb44細胞中ILK mRNA和蛋白的表達水平,抑製HXO-Rb44細胞增殖,並誘導其凋亡。該文發表在《中華眼科雜誌》2012 年第48卷第2期上。
研究通過脂質體轉染法將ILK小幹擾RNA( siRNA)轉入HXO-Rb44細胞。實驗分為4組:ILK siRNA幹預組、陰性對照siRNA組、空脂質體組、空白對照組。RT-PCR法和免疫印跡法分別檢測轉染後48 h ILK mRNA和蛋白的表達水平;CCK-8法檢測轉染後48 h的細胞增殖抑製率;Annexin V/PI免疫熒光雙染色法和流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。各組資料總體比較采用單因素方差分析。
結果顯示,采用脂質體轉染法化學合成的ILK siRNA可以成功轉染HXO-Rb44細胞。RT-PCR法檢測結果顯示,ILK siRNA幹預組(0.12 ±0.02) ILK mRNA表達水平明顯降低,與陰性對照siRNA組(0.45±0.05)、空脂質體組(0.42±0.04)和空白對照組(0.40±0.04)相比,差異有統計學意義(F=12.781,P=0.000)。免疫印跡法檢測結果顯示,與空白對照組(0.38±0.07)、空脂質體組(0.40±0.05)及陰性siRNA對照組(0.43±0.03)相比,ILK siRNA幹預組(0.10±0.03)的ILK蛋白表達水平明顯降低,差異有統計學意義(F=18.647,P=0.000)。與空白對照組(0%)、空脂質體組(1.8%)及陰性siRNA對照組(2.1%)比較,ILK siRNA幹預組(35.0%)的細胞增殖抑製率明顯增高(F =23.573,P=0.000)。Annexin V/PI免疫熒光雙染色法和流式細胞儀檢測結果顯示,ILK siRNA幹預組Annexin V陽性細胞明顯增多,陽性率為26.5%,高於陰性對照siRNA組(5.3%)、空脂質體組(5.0%)、空白對照組(4.6%) (F=65.217,P=0.000)。
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