近日，西安交通大學醫學院第二附屬醫院眼科柏淩、閆歡歡、張德秀等共同發表文章，旨在觀察氧化應激對人視網膜色素上皮(RPE)細胞緊密連接屏障功能及緊密連接蛋白occludin、claudin-1 ～4表達水平的影響。研究表明，氧化應激能夠破壞RPE緊密連接的完整性，使其屏障功能受損，而claudin-1～4的表達水平變化可能在RPE的氧化損傷中發揮重要的作用。該文發表在《中華眼科雜誌》2012 年第48卷第5期上。
近日，西安交通大學醫學院第二附屬醫院眼科柏淩、閆歡歡、張德秀等共同發表文章，旨在觀察氧化應激對人視網膜色素上皮(RPE)細胞緊密連接屏障功能及緊密連接蛋白occludin、claudin-1 ～4表達水平的影響。研究表明，氧化應激能夠破壞RPE緊密連接的完整性，使其屏障功能受損，而claudin-1～4的表達水平變化可能在RPE的氧化損傷中發揮重要的作用。該文發表在《中華眼科雜誌》2012 年第48卷第5期上。
該研究培養人RPE細胞株D407，分為H202處理組和H2O2未處理組(對照組)。MTT法觀察不同濃度H2O2對D407細胞活性的影響；分別應用經上皮電阻(TER)和熒光素鈉滲透實驗檢測低濃度H2O2作用24h和72 h後RPE緊密連接屏障功能的變化；通過實時熒光定量PCR法和免疫印跡法分別從mRNA和蛋白水平檢測H2O2作用24h後對緊密連接蛋白occludin 、claudin-1 ～4表達水平的影響。采用t檢驗統計分析TER、熒光素鈉滲透實驗、實時熒光定量PCR法、免疫印跡法的檢測結果，采用單因素方差分析統計分析細胞活力結果。
結果顯示，H2O2≤0.4 mmol/L時，處理24h對RPE細胞的活力無明顯影響。選擇0.2 mmol/L為後序試驗的濃度。D407細胞培養8d後，TER達到穩定狀態。0.2 mmol/L H2O2作用3h後TER開始下降，至12 h出現明顯差異(18.62±1.89比24.11±0.96，t=4.490，P=0.013)，24h接近最大效應(11.86±1.19比24.13±1.26，t=12.260，P=0.000)，維持至72 h(11.56±1.47比24.33±1.52，t=10.460，p=0.000)。H2O2處理D407細胞24 h後加入熒光素鈉，不同時間點處理組的熒光滲透百分比均高於對照組(20 min：25％±3％比12％±4％，t=-4.50，P=0.011；40 min：36％±4％比16％±5％，t=-5.41，P=0.006；60 min：51％±5％比29％±6％，t=-4.88，P=0.008)。H2O2處理D407細胞24h後，claudin-1、3、4的mRNA和蛋白表達水平較對照組下調(claudin-1 mRNA：0.98±0.18比0.28±0.12，t=5.60，P=0.005，claudin-1蛋白：48±10比100±12，t =5.77，P=0.004；claudin-3mRNA：0.37±0.12比1.03±0.15，t =5.95，P=0.004，claudin-3蛋白：63±13比100±15，t=3.23，P =0.032：claudin-4 mRNA：0.38±0.11比0.99±0.17，t=5.22，P=0.002，claudin-4蛋白：57±12比100±13，t=4.21，P=0.014)，claudin-2 mRNA和蛋白表達水平則較對照組明顯上調(mRNA：1.01±0.22比3.96±0.24，t=-15.69，P=0.000，蛋白：195±15比100±13，t=-8.29，P=0.001)，但occludin的mRNA和蛋白表達水平在處理組和對照組的差異均無統計學意義(mRNA：1.30±0.21比1.02±0.16，t=-1.84，P=0.140，蛋白：109±15比100±14，t=-0.76，p=0.490)。
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