內分泌

含人Apelin-R重組腺病毒載體pDC316-apelinR-EGFP的構建

作者:陳小姣 整理 來源:醫學論壇網 日期:2013-02-03
導讀

           日前,西安交通大學醫學院第一附屬醫院內分泌科和西安市北方醫院心血管內科的研究人員共同發表論文,旨在構建含有人Apelin受體(Apelin-R)基因的pDC316-apelinR-EGFP腺病毒穿梭載體,為糖尿病相關基因Apelin的體內研究提供新方法。此研究成功構建了真核表達載體pDC316-apelinR-EGFP,得到了表達綠色熒光蛋白的Apelin-R腺病毒,該病毒有望用於糖尿病的體內研究實驗。該文章發表在2012年06卷16期的《中華臨床醫師雜誌》上。

  日前,西安交通大學醫學院第一附屬醫院內分泌科和西安市北方醫院心血管內科的研究人員共同發表論文,旨在構建含有人Apelin受體(Apelin-R)基因的pDC316-apelinR-EGFP腺病毒穿梭載體,為糖尿病相關基因Apelin的體內研究提供新方法。此研究成功構建了真核表達載體pDC316-apelinR-EGFP,得到了表達綠色熒光蛋白的Apelin-R腺病毒,該病毒有望用於糖尿病的體內研究實驗。該文章發表在2012年06卷16期的《中華臨床醫師雜誌》上。

  PCR方法分別擴增Apelin-R基因,測序正確後與載體pDC316-EGFP連接,構建重組腺病毒載體pDC316-apelinR-EGFP;脂質體法與腺病毒骨架載體共轉染HEK293細胞進行重組腺病毒包裝,稀釋法測定腺病毒滴度。RT-PCR和Western blot方法檢測Apelin-R的表達。

  限製性核酸內切酶鑒定及測序結果均證明Apelin-R基因成功擴增並克隆到重組腺病毒載體pDC316-apelinR-EGFP。在HEK293中成功包裝出含Apelin-R的腺病毒Ad-apelinR-EGFP,病毒滴度為3.1×109 TCID50/ml,感染Ad-apelinR-EGFP的HEK293E細胞中可檢測到Apelin-R的mRNA和蛋白表達。

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