為了支持新型冠狀病毒(COVID-19)的檢測及疫苗研發工作,美國疾病預防控製中心(CDC)和中國政府都已完成了新型冠狀病毒基因組的測序並將結果提交至US NCBI GenBank®數據庫 [1]。近日,IDT收到了來自世界各地研究人員關於新型冠狀病毒檢測試劑盒的詢問,以下是部分簡要說明。
為了支持新型冠狀病毒(COVID-19)的檢測及疫苗研發工作,美國疾病預防控製中心(CDC)和中國政府都已完成了新型冠狀病毒基因組的測序並將結果提交至US NCBI GenBank®數據庫 [1]。近日,IDT收到了來自世界各地研究人員關於新型冠狀病毒檢測試劑盒的詢問,以下是部分簡要說明。
美國疾病預防控製中心
美國疾病預防控製中心檢測試劑盒* 靶向COVID-19核衣殼蛋白基因(N-基因)上的不同位點。該試劑盒中的3組引物/探針必須與靶向人RNase P基因的內部對照同時運行。每個患者樣本共需進行4次qPCR檢測。
1.該檢測試劑盒采用一步法qPCR反應(即逆轉錄和後續qPCR反應在同一步驟中完成);
2.所有3次N-基因檢測隻有在Cq <35時方可視為陽性結果;
3.RNase P內部對照反應是關鍵。Cq >35表示樣本提取不佳,需要重複實驗;
敬請查閱最新的美國疾病預防控製中心 COVID-19 RT-PCR檢測方法實驗室指南,獲取相關文檔及實驗方案。
與其他檢測試劑盒的比較
世界衛生組織(WHO)
世界衛生組織實驗方案不同於美國疾病預防控製中心實驗方案。世界衛生組織建議需進行3次qPCR反應來確認是否感染COVID-19。盡管這是一套完整的實驗方案,但沒有美國疾病預防控製中心檢測方法來得快,因為它需要連續進行3次檢測,且必須觀察到陽性結果才能進行下一次檢測。該實驗方案按如下順序進行檢測:
1.冠狀病毒E-基因
2.RdRP基因:針對SARS 冠狀病毒和其他蝙蝠相關冠狀病毒
3.RdRP基因:針對COVID-19
中國疾病預防控製中心
中國疾病預防控製中心檢測試劑盒建議采用2組引物/探針。第1組靶向ORF 1ab,第2組用於確認COVID-19的N-基因。
對照組
初步的電子模擬分析表明,搭配使用 IDT N-基因陽性對照組模板**與美國疾病預防控製中心檢測試劑盒,與使用中國疾病預防控製中心、泰國衛生部以及HKU的引物/探針組進行類似實驗獲得的結果相符。當然,這是基於電子模擬研究,建議用戶在自己的實驗室中對所選試劑盒進行驗證。
如需了解更多信息,請登錄www.idtdna.com/pages/landing/coronavirus-research-reagents
參考文獻
1.(2020)2019 Novel Coronavirus (2019-nCoV), Wuhan, China. [Online] US Centers for Disease Control and Prevention. [Accessed 28 Jan 2020].
* IDT並非、也未聲稱是美國疾病預防控製中心冠狀病毒引物探針序列的主要、首選或推薦供應商。IDT可獨立提供CDC公布的用於冠狀病毒檢測的引物和探針序列,訂購非常方便。
** IDT對照並非由CDC設計、檢測和驗證,也未得到CDC或其他公共衛生機構的認可。這些對照由IDT單獨設計,針對SARS、MERS和COVID-19的核衣殼蛋白全基因,是為了方便客戶而提供的。如果用於解釋檢測結果,最終用戶應進行對照驗證。
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